一、提出问题：工程化培养的系统难题
在组织模型工程化开发中，面临三大系统性问题：流程标准化缺失、质控维度不全面、体内外模型数据不通。PDX 模型传代稳定性、原代细胞得率与纯度、遗传一致性均缺乏量化指标，导致实验难以复现，无法满足工程化、平台化运行需求，制约技术落地与大规模应用。
二、分析问题：关键技术节点与风险点
- 组织消化与细胞获取：酶浓度、消化温度、时间协同不当，易导致细胞碎片多、活率低、间质污染严重。
- PDX 模型传代失控：宿主适配、移植体积、传代代次控制不当，引发组织退化、生长停滞、性状丢失。
- 原代培养体系不稳定：培养基配方、血清批次、接种密度、换液节奏波动，直接影响扩增效率。
- 质控不闭环：仅以形态判断合格与否，缺少遗传学、染色体层面验证，模型真实性存疑。
- 数据不可追溯：无全流程记录体系，样本来源、培养参数、鉴定结果无法关联，不满足工程化要求。
三、解决问题：全流程工程化方案
构建PDX + 原代细胞定制工程化体系，实现流程、参数、质控、数据一体化：
- 标准化流程：制定 SOP 覆盖组织采集、预处理、移植、传代、细胞分离、培养、冻存、复苏全环节。
- 参数优化：确定最佳消化体系、接种密度、培养基组合、传代比例，提升细胞活率与 PDX 成模率。
- 原代细胞定制工程化：建立稳定扩增工艺，实现原代细胞定制的可重复、可放大、可批次交付。
- 三级质控：一级（形态 / 活率）、二级（标志物表达）、三级（全外显子测序 + 核型），确保稳定性与保真度。
- 数据管理：建立样本 - 模型 - 细胞 - 鉴定全链条数据库，支持追溯、比对与共享。
四、直观数据：工程化指标与验证结果
- PDX 工程化指标：3 例模型成功传至 F3，生长曲线稳定，成模率与传代存活率达到工程化使用标准。
- 原代细胞定制指标：成功构建 3 株细胞，活率≥85%，增殖稳定，可连续传代且保持特征表型。
- 质控通过率：组织学符合率高，免疫组化结果一致，全外显子测序证实遗传稳定，核型正常率 100%。
- 重复性数据：多批次实验流程一致，结果偏差小，满足实验室间复现要求。
- 技术输出能力：该方案可直接转化为标准化服务流程，支持模型构建、原代细胞定制、技术培训与平台共建。
参考文献
陈宛灵，田臻，李江。唾液腺多形性腺瘤 PDX 模型的构建及原代细胞的分离培养 [C]//2023 年中华口腔医学会口腔病理学专业委员会第十七次全国学术会议暨换届大会论文集，2023:51.
